Впг пцр что это такое
Вирус простого герпеса (ВПГ) метод ПЦР Real-Time (количественное определение)
ПЦР (полимеразная цепная реакция) – современный, один из наиболее точных методов выявления возбудителей различных инфекций. В основе ПЦР лежит принцип многократного увеличения минимального количества (даже одной молекулы) фрагментов ДНК или РНК возбудителя в биологической пробе пациента. ПЦР позволяет выявить возбудителя на самых ранних стадиях инфекции в любом биологическом материале, полученном от больного (кровь, моча, слюна, сперма, отделяемое урогенитального тракта, секрет простаты, грудное молоко, ликвор, слеза, соскобы с очагов).
В процессе исследования происходит многократное увеличение числа копий фрагментов молекулы ДНК или РНК (за счет копирования) уникальной для конкретного искомого микроогранизма и идентификация возбудителя болезни с помощью обнаружения генетических маркеров.
Модификацией ПЦР является ПЦР-РТ (ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени), которая позволяет в любой из сред организма определить вирусную нагрузку, то есть, количество вирусных копий, которые в настоящий момент присутствуют в этих средах.
ПЦР-РТ используется для подтверждения диагноза хронических вирусных инфекций. Определение вирусной нагрузки в динамике позволяет оценить эффективность проводимой терапии и, при необходимости, скорректировать терапию.
Показания для назначения:
Рекомендации по подготовке к сдаче анализа:
Инфекция, вызываемая вирусом простого герпеса
Вирус простого герпеса (ВПГ) – ДНК–содержащий вирус Herpes simplex virus семейства Herpesviridae подсемейства Alphaherpesvirinae. Согласно статистическим данным ВОЗ, инфекции, обусловленные ВПГ, занимают второе место по распространенности среди вирусных заболеваний человека. Различают два серотипа ВПГ – ВПГ-1 и ВПГ-2. Оба типа вируса вызывают инфекционные заболевания человека различной степени тяжести от характерных везикулезных или пустулезных высыпаний на коже и слизистых до поражений ЦНС. ВПГ-1 – причина офтальмогерпеса, протекающего в форме кератита или кератоиридоциклита, реже увеита, в единичных случаях — ретинита, блефароконъюнктивита. Заболевание может привести к помутнению роговицы и вторичной глаукоме. ВПГ-1 — основная причина энцефалита у взрослого населения стран умеренного климата, при этом только у 6–10% больных отмечается одновременное поражение кожи.
В ходе проведения эпидемиологических исследований установлено наличие специфических АТ к ВПГ у 90–95% обследуемых лиц среди взрослого населения, при этом первичная инфекция манифестно протекает лишь у 20–30% инфицированных.
ВПГ характеризуется коротким циклом репродукции в клеточных культурах и оказывает сильное цитопатическое действие. Он способен к репродукции в различных типах клеток, чаще персистирует в ЦНС, преимущественно в ганглиях, поддерживая латентную инфекцию с возможностью периодической реактивации. Наиболее часто вызывает кожно-слизистые формы заболевания, а также поражение ЦНС и глаз. Геном ВПГ может интегрироваться с генами других вирусов (включая ВИЧ), вызывая их активацию, также возможен его переход в активное состояние на фоне развития иных вирусных и бактериальных инфекций.
Пути передачи ВПГ: воздушно-капельный, половой, контактно-бытовой, вертикальный, парентеральный. Факторами передачи ВПГ служат кровь, слюна, моча, везикулярный и вагинальный секрет, сперма. Входными воротами являются поврежденные слизистые оболочки и кожа. По периферическим нервам вирус доходит до ганглиев, где сохраняется пожизненно. При активации ВПГ распространяется по нерву к первоначальному очагу поражения (механизм “замкнутого цикла” – циклическая миграция вируса между ганглием и поверхностью кожи). Может происходить лимфогенная и гематогенная диссеминация возбудителя, что особенно характерно для недоношенных новорожденных и лиц с выраженным иммунодефицитом (в т. ч. при ВИЧ-инфекции). ВПГ обнаруживается на лимфоцитах, эритроцитах, тромбоцитах, при проникновении вируса в ткани и органы возможно их повреждение вследствие его цитопатического действия. Сохраняющиеся в течение всей жизни у человека вируснейтрализующие АТ (даже в высоких титрах), хотя и препятствуют распространению инфекции, но не предупреждают рецидивов.
Выделение ВПГ продолжается значительное время при первичном инфицировании (ДНК выявляется в плазме крови в течение 4–6 недель), при рецидивах – не более 10 дней. Формирование противогерпетического иммунитета происходит как при манифестном, так и при бессимптомном течении инфекции. При первом контакте АГ с клетками иммунной системы в течение 14–28 дней формируется первичный иммунный ответ, который у иммунокомпетентных лиц проявляется образованием интерферонов, выработкой специфических АТ (вначале – IgM, впоследствии – IgA и IgG), повышением активности естественных киллеров – NK-клеток и формированием мощного пула высокоспециализированных киллеров. В случае реактивации или реинфекции возникает повторный контакт клеток иммунной системы с АГ, образуются АТ и Т-киллеры. Реактивация сопровождается продукцией АТ IgM (редко даже при наличии типичных высыпаний), АТ IgА (чаще) и IgG.
ВПГ (преимущественно ВПГ-2) вызывает генитальный герпес – хроническое рецидивирующее заболевание. Клинические проявления первичного эпизода инфекции, вызванной разными типами вируса сходны, однако инфекции, вызванной ВПГ-2, в гораздо большей степени свойственен рецидивирующий характер. Передача вируса происходит при половых контактах, очаг инфекции локализуется на слизистой и коже половых органов и перигенитальной зоны. Размножение вируса в клетках эпителия приводит к образованию очага сгруппированных пузырьков (папул, везикул), в которых содержатся вирусные частицы, сопровождается покраснением, зудом. Первичный эпизод протекает острее (обычно с симптомами интоксикации), чем последующие рецидивы. Часто возникают симптомы дизурии, признаки эрозии шейки матки.
На ранних стадиях ВИЧ-инфекции течение заболеваний, вызванных ВПГ-1 или ВПГ-2, короткое и типичное. Частым признаком углубления иммуносупрессии и перехода латентной стадии ВИЧ-инфекции в стадию вторичных заболеваний служит развитие опоясывающего лишая. Наличие стойких глубоких вирусных поражений кожи, повторный или диссеминированный опоясывающий лишай, локализованная саркома Капоши — одни из клинических критериев стадии вторичных заболеваний ВИЧ-инфекции. У больных с количеством CD4+-клеток менее 50 клеток/мкл отсутствует тенденция к самостоятельному заживлению эрозивно-язвенных дефектов. Частота герпетического энцефалита среди поражений ЦНС при ВИЧ-инфекции — около 1–3%. У больных СПИДом с наличием глубокого иммунодефицита заболевание нередко протекает атипично: болезнь начинается подостро и медленно прогрессирует до тяжелейших проявлений энцефалита.
Герпетическая инфекция даже при бессимптомном течении способна вызвать целый ряд патологий у беременной и новорожденного. Наибольшую угрозу репродуктивной функции представляет генитальный герпес, который в 80% случаев обусловлен ВПГ-2 и в 20% – ВПГ-1. Бессимптомное течение чаще имеет место у женщин и более типично для ВПГ-2, чем для ВПГ-1. Первичное инфицирование или рецидивы во время беременности наиболее опасны для плода, поскольку могут привести к самопроизвольному выкидышу, гибели плода, мертворождению, порокам развития. Заражение плода и новорожденного чаще отмечается при бессимптомном течении генитального герпеса, чем при клинически выраженном типичном течении. Новорожденный может приобрести герпетическую инфекцию внутриутробно, во время родов (в 75–80% случаев), либо постнатально.
ВПГ-2 может проникать в полость матки через цервикальный канал с поражением плода в 20–30% случаев; трансплацентарное инфицирование может происходить в 5–20% случаев, инфицирование во время родов – в 40% случаев. Возможна передача вируса при выполнении медицинских процедур. При типичных клинических проявлениях диагноз герпетической инфекции трудностей не представляет, тогда как при атипичных формах верифицируется на основании результатов лабораторных исследований, при этом приоритетными должны быть исследования, направленные на выявление маркеров текущей (активной) инфекции. Активация инфекционного процесса при герпетической инфекции, даже при наличии клинических проявлений в стадии обострения, редко сопровождается выработкой АТ-ВПГ IgM (чаще – при первичной инфекции либо реинфекции), как правило, при этом отмечают появление АТ-ВПГ IgА.
Целесообразными являются диагностические исследования для обнаружения ВПГ или его маркеров при наличии в анамнезе пациента указаний на рецидивирующую инфекцию либо на дебют герпетической инфекции в период беременности.
Дифференциальная диагностика. При наличии инфекционного синдрома (длительный субфебрилитет, лимфаденопатия, гепато- или гепатоспленомегалия) – токсоплазмоз, цитомегаловирусная инфекция и инфекция, вызванная ВЭБ; контактный дерматит, инфекционные заболевания, сопровождающиеся везикулезными высыпаниями на коже и слизистых оболочках (ветряная оспа, опоясывающий герпес, пиодермия и др.); эрозивно–язвенные поражения гениталий, обусловленные Treponema pallidum, Haemophilus ducreyi; болезнь Крона, синдром Бехчета, фиксированная токсикодермия, менингоэнцефалиты и менингиты неясной этиологии, увеиты и кератоконъюнктивиты неясной этиологии).
Показания к обследованию
Материал для исследования
Этиологическая лабораторная диагностика включает микроскопическое исследование, выделение и идентификация вируса в культуре клеток, выявление АГ или ДНК возбудителя, определение специфических АТ.
Материал с поверхности высыпаний может быть использован для микроскопических (окраска препаратов по Романовскому–Гимзе) или цитологических (окраска препаратов по Тцанку и Папаниколау) исследований. Названные процедуры имеют низкую диагностическую специфичность (не позволяют дифференцировать ВПГ от других герпес-вирусов) и чувствительность (не более 60%), поэтому не могут считаться надежными методами диагностики.
Выявление АГ ВПГ в крови, СМЖ, содержимом везикулезных или пустулезных высыпаний и других локусов (носоглотки, конъюнктивы, уретры, влагалища, цервикального канала) проводят методами РИФ и РНИФ с использованием моноклональных или высокоочищенных поликлональных АТ. При использовании метода ИФА чувствительность исследования возрастает до 95% и более, специфичность при манифестном герпесе варьирует от 62 до 100%. Однако большинство наборов реагентов для выявления антигена ВПГ методом ИФА не позволяют провести дифференцирование серотипов вируса.
Обнаружение ДНК ВПГ-1 и/или ВПГ-2 при использовании ПЦР в различном биологическом материале превосходит чувствительность обнаружения ВПГ при использовании вирусологического исследования. Выявление ВПГ в соскобах со слизистых оболочек полости рта, урогенитального тракта, в отделяемом пузырьковых высыпаний (везикул) и эрозивно–язвенных поражений кожи с помощью ПЦР является методом выбора. Несомненную ценность имеет определение количества ДНК ВПГ методом ПЦР в режиме реального времени, результаты исследования можно использовать как с диагностической целью, так и для оценки эффективности лечения.
Для выявления АТ к ВПГ разных классов IgА, IgG, IgM, суммарных к антигенам ВПГ обоих типов или типоспецифичных, применяют методы РНИФ или ИФА, для определения авидности АТ IgG – метод ИФА. Наибольшее диагностическое значение имеет детекция АТ IgM как показателя активности процесса, их выявление может свидетельствовать об остром заболевании, реинфекции, суперинфекции или реактивации. Однако в клинически выраженных случаях, в т. ч. при типичном течении генитального или неонатального герпеса, специфические АТ IgM выявляются редко (в 3–6% случаев). Определение авидности АТ-ВПГ IgG несет низкую информационную нагрузку: реактивация при клинически выраженных случаях сопровождалась наличием высокоавидных АТ. Тест на выявление АТ-ВПГ IgА является методом выбора наряду с определением ДНК либо АГ ВПГ при определении активности инфекционного процесса.
Показания к применению различных лабораторных исследований. Определение АТ целесообразно проводить для подтверждения первичной инфекции, а также установления диагноза у пациентов с бессимптомным и атипичным течением заболевания.
У беременных женщин (скрининг) целесообразно проведение исследований для выявления АТ-ВПГ IgМ, а также выявление АТ-ВПГ IgА. Для беременных высокого инфекционного риска дополнительно рекомендуется определение ДНК и АГ ВПГ в лейкоцитарной взвеси или в материале из предполагаемого очага.
При подозрении на внутриутробную инфекцию рекомендуется выявление ДНК вируса в пуповинной крови, у новорожденных – детекция ДНК вируса в различных биологических пробах (отделяемое пузырьковых высыпаний (везикул) эрозивно– язвенных поражений кожи и слизистых оболочек, ротоглотки, конъюнктивы; периферическая кровь, СМЖ, моча и др.), а также определение АТ-ВПГ IgМ и IgА в крови. Учитывая высокую диагностическую значимость определения ДНК вируса методом ПЦР и наличие зависимости между летальностью у новорожденных и виремией, вызванной ВПГ, некоторые исследователи рекомендуют использовать этот метод для лабораторного скрининга генерализованной герпетической инфекции детей, относящихся к группе высокого риска.
Выявление АГ-ВПГ в различных биологических пробах предлагается применять в качестве экспресс-тестов для дифференцирования типов вируса при скрининге популяций с высоким уровнем заболеваемости, а также при мониторинге заболевания.
У больных ВИЧ-инфекцией с атипичными клиническими проявлениями кожных поражений в диагностике отдается предпочтение выявлению ДНК ВПГ методом ПЦР как самому чувствительному методу лабораторной диагностики.
Особенности интерпретации результатов. Обнаружение вирусоспецифических АТ IgM может свидетельствовать о первичной инфекции, реже – о реактивации или реинфекции, выявление АТ-ВПГ IgА – об активности инфекционного процесса (затяжное течение при дебюте герпетической инфекции, реинфекции или реактивации). О врожденной инфекции (неонатальный герпес) свидетельствует присутствие АТ-ВПГ IgM и(или) IgА. Выявление АТ IgG отражает латентную инфекцию (инфицирование).
Выявление ДНК ВПГ свидетельствует о наличии активной (репликативной) стадии вирусной инфекции с учетом выраженности клинических проявлений. Выявление ДНК ВПГ-1 и/или ВПГ-2 методом ПЦР позволяет при однократном тестировании установить факт внутриутробного инфицирования плода; при проведении обследования в первые 24–48 ч после рождения лабораторно подтвердить врожденную инфекцию, вызванную ВПГ.
Диагностическое значение (специфичность и чувствительность) обнаружения ДНК ВПГ в СМЖ у больных ВИЧ-инфекцией с поражением ЦНС окончательно не установлены. Возможно, для подтверждения герпетической этиологии энцефалита необходимо определение концентрации ДНК ВПГ в СМЖ. Исследование для обнаружения ДНК ВПГ в крови малоинформативно в связи кратковременным нахождением ВПГ в сосудистом русле, следовательно, возможно получение отрицательного результата несмотря на развитие клинически выраженного заболевания.
ВПГ «предскажет» снижение иммунитета, и что еще нужно знать о носительстве вируса герпеса
Близкие, но не равные
На сегодняшний день медицина выделяет всего 7 значимых для человека типов герпеса. А в этой статье речь пойдет о двух первых: простом герпесе 1 и 2 (ВПГ 1 и 2).
Оба типа структурно очень похожи между собой, оба (1, 2 или их сочетание) – выявляются почти у 90% взрослого населения, оба пожизненно остаются в нервных ганглиях, но отличаются «предпочтениями» по поражаемым органам и вероятными последствиями своего присутствия.
Так, первый (или лабиальный) тип герпеса известен многим «под именем простуды» на губах. И в большинстве случаев «базируется» именно в этой области. Но приблизительно в 20% случаев все же «мигрирует» на область половых органов, сопровождаясь признаками генитального герпеса.
В тяжелых случаях, ВПГ-1 может вызывать стоматит, конъюнктивит, пневмонию, поражение ткани (энцефалит) и оболочек (менингит) головного мозга, а также различные нейропатии.
При этом, инфицирование чаще происходит еще в детстве, «профилактируя» тем самым заражение ВПГ-2. Однако, в то же время, антитела к ВПГ-1 способны «поддерживать» бессимптомное течение инфекции, вызванной ВПГ-2.
Второй (или генитальный) тип герпеса занимает второе место «в рейтинге» инфекций, передающихся половым путем. И способен поражать кожу и слизистые наружных и внутренних половых органов.
Кроме того, персистенция ВПГ-2 у женщин связана с хроническим сальпингоофаритом (воспаление яичников и маточных труб), бесплодием и невынашиванием. А активная инфекция во время родов чревата тяжелыми осложнениями для плода.
Когда иммунитет ограничен
Отличительной чертой 1 и 2 представителей семейства герпес-вирусов является их способность эффективно ускользать от «надзора» ослабленных иммунных механизмов.
Однако, при нормальном иммунитете, антитела к ВПГ вырабатываются «по той же схеме», что и к любой другой инфекции.
Так, IgM и IgA) обнаруживаются в крови спустя 2-3 недели от начала клинических признаков, являются маркером острой «свежей» или обострения уже имеющейся инфекции, с сохранением антител максимум до 1 года.
А IgG появляются не ранее, чем через 3-4 недели и сохраняются в крови годами. Правда 100% защиты от герпеса все равно не дают и их уровень сильно зависит от индивидуальных особенностей иммунитета.
Нарушения иммунных механизмов, связаные с герпесом:
Причем у людей, регулярно страдающих от признаков ВПГ, нарушения иммунитета, как правило, имеют место еще с детства. А найти «поломанное» звено и составить схему терапии может помочь анализ крови на иммунный статус (10.0.D10.204).
Впг пцр что это такое
Исследование для выявления возбудителя герпес-вирусной инфекции 1-го и 2-го типа (Herpes Simplex Virus 1/2), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (ДНК) вируса простого герпеса.
Вирус герпеса, вирус простого герпеса 1-го (HSV-1) и 2-го (HSV-2) типа, определение герпеса по ДНК.
Синонимы английские
Herpes Simplex Virus, Type 1 and Type 2, HSV-1 or HSV-2 IgM or IgG, HSV-1, HSV-2, HHV1, HHV2.
Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Мазок из зева (ротоглотки), секрет простаты, первую порцию утренней мочи, соскоб из прямой кишки, слюну, соскоб с эрозивно-язвенных элементов, соскоб урогенитальный, эякулят, венозную, капиллярную кровь, ликвор.
Общая информация об исследовании
Методом ПЦР возможно выявить даже небольшое количество вирусных частиц в биологическом материале. Он позволяет идентифицировать вирусы герпеса вне зависимости от срока заражения даже в тот период, когда антитела еще не образовались.
Наиболее распространенными являются 1-й и 2-й типы герпеса. Оба заразные и способствуют появлению на слизистых оболочках маленьких пузырьков (везикул), которые лопаются, образуя открытые ранки. При HSV-1 пузырьки появляются вокруг рта и в ротовой полости, тогда как HSV-2 обычно поражает участки в районе гениталий.
В случае первичного инфицирования на месте заражения через две недели обычно образуются болезненные пузырьки, которые, как правило, проходят через четыре недели. Они появляются на половых органах, вокруг ануса, на ягодицах либо на бедрах, после чего могут лопаться. Кроме того, возможно появление симптомов, напоминающих грипп, например озноба и болей в горле.
Однако пузырьки при герпесе образуются не всегда. Иногда проявления болезни бывают настолько слабыми, что остаются незамеченными либо ошибочно принимаются за что-то другое, например за укусы насекомых или за аллергию. После попадания инфекции в организм и ее распространения вирус герпеса находится в латентной форме. При стрессе или других заболеваниях, приводящих к снижению иммунитета, он может активизироваться заново. В большинстве случаев простой герпес не опасен для здоровья, однако он может вызывать тяжелые заболевания: неонатальный герпес (если ребенок заразится при родах от матери, инфицированной генитальным герпесом) и энцефалит. Они способны привести к серьезным неизлечимым неврологическим заболеваниям и даже к смерти. Риск заражения герпесом повышают следующие факторы:
В настоящее время излечение от герпеса не представляется возможным, тем не менее существуют противовирусные препараты, которые подавляют его распространение, а также укорачивают продолжительность острой фазы вирусной инфекции и смягчают симптомы болезни.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
Вирус герпеса 1,2 типов, ДНК (HHV-1,2, ПЦР) плазма, кач. в Москве
Исследование направлено на выявление ДНК вируса простого герпеса 1 и 2 типа в крови с помощью полимеразой цепной реакции (ПЦР).
Приём и исследование биоматериала
Когда нужно сдавать анализ Вирус герпеса 1,2 типов, ДНК (HHV-1,2, ПЦР) плазма, кач.?
Подробное описание исследования
Вирус простого герпеса является одним из самых распространенных возбудителей, поражающих человеческий организм. Выделяют 2 типа вируса простого герпеса.
Такое разделение не является строгим. Оба типа вируса способны поражать вышеуказанные органы и ткани.
Инфицирование вирусом простого герпеса происходит в раннем детском возрасте. Возбудитель обладает высокой контагиозностью (заразностью) и передается от человека к человеку половым, контактно-бытовым и воздушно-капельным путями и
По разным данным, от 90 до 95% взрослых людей являются носителями вируса простого герпеса.
При генитальном герпесе возможно развитие герпетического цистита и уретрита. При данном заболевании появляются боли при мочеиспускании, может возникнуть гематурия (кровь в моче), изменяются частота, характер струи, количество мочи. Также может отмечаться зуд и покраснение кожных покровов половых органов.
Такие состояния, как ослабление иммунитета, длительные стрессы, долгое пребывание на солнце, оперативное вмешательство и другие причины провоцируют реактивацию инфекции.
Тяжелое течение заболевания отмечается у новорожденных и людей с иммунодефицитами разного происхождения (ВИЧ, прием подавляющих иммунитет препаратов).
Выявление генетического материла вируса в крови позволяет быстро и точно идентифицировать возбудителя.