какую процедуру необходимо провести перед тем как окрасить мазок

Какую процедуру необходимо провести перед тем как окрасить мазок

Содержимое заднего свода влагалища для исследования берут браншей пинцета, узким деревянным шпателем или стеклянной пипеткей длиной 20 см, диаметром 5—7 мм с изогнутым дистальным концом и резиновым баллоном на проксимальном конце. Так как особенности влагалищного содержимого могут быть различными в зависимости от длительности пребывания во влагалище и особенностей его моторной функции, рекомендуется за 2 дня до взятия мазка механически очистить влагалище от содержимого и воздерживаться от влагалищных манипуляций и половых сношений. У девственниц содержимое влагалища берут проволочной петлей через ушное или носовое зеркало или с помощью детского вагиноскопа.

Предметные стекла для влагалищных мазков должны быть предварительно обезжирены. Мазок делают с помощью шлифопанного стекла. Он должен быть тонким. При скудном содержимом влагалища насасывают в пипетку до взятия мазка каплю изотонического раствора хлорида натрия и разведенные выделения наносят на стекло. Мазок фиксируют по влажном состоянии в течение 15 мин смесью 96% этилового спирта и диэтилового эфира (1 : 1). Мазок может оставаться в фиксирующем растворе в течение 15 дней.

При подготовке влагалищного мазка для полихромной окраски рН фиксирующего раствора снижают с 6,9—7 до 5,6—6, что способствует большей восприимчивости клеток к ацидофильной окраске. Для этого мазок фиксируют смесью из изопропилового спирта (97,5 части) и ледяной уксусной кислоты (2,5 части).

1. Упрощенный метод окраски. Высушенный на воздухе мазок окрашивают 1 % раствором метиленового синего в течение 2 мин или раствором фуксина (3 г фуксина+96 мл абсолютного спирта) в течение 1 мин. Краску смывают проточной водой и мазок высушивают.

2. Окраска гематоксилин-эозином. Фиксированный в смеси спирта с эфиром мазок окрашивают в течение 15 мин в растворе гематоксилина, смывают краску водой, окрашивают на протяжении 3—5 мин эозином и повторно смывают водой. Для обесцвечивания ядер мазок проводят последовательно через 70% (5 мин), 95% (5 мин) и 100% (8 мин) спирт, высушивают, помещают на 15 мин в ксилол и заключают в канадский бальзам.

3. Полихромная окраска. Применяются три краски — гематоксилин для окрашивания ядер клеток влагалищного эпителия, оранж 0,6 (ацидофильная) и зелень лихтгрюн Lumiere EA-31 (базофильная).

Фиксированный мазок проводят последовательно через 70% и 50% спирт, погружают в дистиллированную воду, окрашивают в течение 5— 10 мин гематоксилином. Промывают в дистиллированной воде, 4—5 раз в 0,5% водном растворе НСl, а затем проточной водой. На 1 мин мазок погружают в карбонат кальция (3 капли насыщенного водного раствора на 100 мл воды) и проводят последовательно через 50%, 70%, 80% и 95% спирт, в течение 3—4 мин окрашивают оранжем, проводят дважды через 95% спирт, погружают на 10—15 мин в краску ЕА-31, затем в 95% и абсолютный спирт и заключают в канадский бальзам.

Ядра влагалищных клеток окрашиваются интенсивно в светло-синие, темно-пурпурные тона, цитоплазма базофильных клеток — в голубовато-зеленоватые тона, цитоплазма ацидофильных клеток — в желтовато-оранжевые, розовато-красные тона.

Влажный фиксированный мазок окрашивают специальным сложным составом из ряда красок в течение 2 мин. Последовательно проводят мазок через 70%, 90% и абсолютный спирт, помещают в ксилол и заключают в канадский бальзам.

Состав краски: а) этилового спирта 100 мл, шарлаха бибиховского 0,5 г, оранжа 0,25 г, зеленой 0,075 г, фосфорно-молибденовой кислоты 0,5 мл, фосфорно-вольфрамовой кислоты 0,5 мл, ледяной уксусной кислоты 1 мл;

б) фосфорно-вольфрамовой кислоты 0,5 мл, фосфорно-молибденовой кислоты 0,5 мл, ледяной уксусной кислоты 1 мл, эритрозина 0,5 г, бриллиантового зеленого 0,075 г, 20% водного раствора анилинового синего 20 мл, 60% спирта 80 мл.
Окраска цитоплазмы и ядер клеток аналогична окраске по методу Паваниколау.

Комбинация приведенных выше методов окраски. Фиксированный мазок на 2—4 мин помещают в приготовленный полихромный протоплазменный краситель, затем последовательно помещают в 75% и 95% спирт и ксилол. Высушивают и заключают в кедровое масло.

Состав краски: оранжа 0,100 г, эритрозина 0,250 г, лихтгрюна 0,200 г, фосфорно-молибденовой кислоты 0,200 г, фосфорно-вольфрамовой кислоты 0,200 г, ледяной уксусной кислоты 1 г, 50% спирта 100 мл. Для приготовления краски 50% спирт разделяют на три равные части, в каждой из них растворяют отдельно оранж, лихтгрюн и эритрозин. После полного растворения каждой краски все смешивают и добавляют остальные реактивы.
Цитоплазма базофильных клеток окрашивается в светло-зеленые тона, ацидофильных — в золотисто-розовые.

Для лучшего прокрашивания ядер способ окраски несколько видоизменяют. Фиксированный мазок окрашивают гематоксилином в течение 1 мин, промывают проточной водой, после чего в течение 2—4 мин окрашивают описанным выше способом полихромным красителем.

Фиксированный одним из описанных выше способов мазок промывают в течение 2 мин в дистиллированной воде, окрашивают в течение 1—3 мин гематоксилином, промывают в течение 4—10 мин проточной водой, на 2 мин помещают в смесь из 70% изопропилового спирта с 2,5% уксусной кислоты; окрашивают по второму способу, промывают и снова помещают на 2 мин в смесь изопропилового спирта с уксусной кислотой (2,5%), на 2 мин в изопропиловый спирт, на 2 мин в ксилол и заключают в канадский бальзам.

Источник

Окраска гематологических препаратов. Как оптимизировать этот процесс?

Куриляк О.А., к.б.н.

Исследование морфологии клеток уже много десятилетий является «золотым стандартом» диагностики в гематологии. Поэтому к качеству мазка крови в гематологической лаборатории предъявляются очень высокие требования. В правильно приготовленном мазке крови должна быть сохранена целостность клеток, они должны находиться в монослое и располагаться по поверхности стекла равномерно, оканчивается такой мазок щеточкой.

При окраске мазка надо стремиться к выполнению следующих условий:

От чего же зависит качество окраски элементов клеточных структур? Зависит оно от 5-ти основных условий:

Варьируя этими параметрами, подбираются оптимальные условия окраски.

По нашей просьбе в НИИ Детской Гематологии МЗ РФ профессором Владимирской Е.Б. проведена сравнительная оценка оптимального использования гематологических красителей. Всего было окрашено и проанализировано 2 868 мазков крови, в том числе 126 мазков с бластемией и 118 мазков костного мозга. Для окраски мазков использовали азур-эозин по Романовскому от трех российских производителей, эозин-метиленовый синий по Майн-Грюнвальду, эозин-метиленовый синий по Лейшману и фиксатор-краситель «Гемокрафикс». Для первого красителя изучали 2 фиксатора (по Май-Грюнвальду и по Лейшману). Для всех красителей подбиралось оптимальное время фиксации, оптимальное время экспозиции краски и оптимальное разведение краски Каждый вариант отрабатывался при окрашивании на рельсах и в ванночках. В последнем случае изучалась длительность срока годности разведенной краски на протяжении 10 дней.

В результате проведенной работы были сделаны следующие выводы:

«Минилаб-301» позволяет оптимальным образом организовать рабочее место лаборанта для окраски мазков.

Окраска производится в штативе в просторных ванночках, которые закрываются крышками. Ванночки компактно размещены на удобном подносе, что исключает нежелательное разбрызгивание краски.

Четыре независимо программируемых таймера помогают лаборанту строго выдерживать временные режимы окраски мазков.

Вместо ручных манипуляций с каждым отдельным стеклом лаборант обрабатывает штатив, перенося его из ванночки в ванночку или сушильную камеру строго по звуковым сигналам таймеров. В штативе можно разместить до 25 стекол (причем можно использовать как импортные стекла, так и стекла отечественного производства). Окраску можно проводить одновременно в нескольких ванночка. В результате существенно сокращается время на окраску большой партии мазков. Установка таймеров на новое время окраски в зависимости от вида, состава и качества используемого красителя не вызывает никаких затруднений. Освоить прибор несложно благодаря простоте конструкции и хорошо написанной инструкции по эксплуатации.

Отсек сушки мазков обеспечивает высушивание за 3 минуты благодаря оптимально подобранным температуре и скорости потока воздуха.

Комплект принадлежностей к «Минилабу-301» включает поддон, 4 штатива для предметных стекол и 4 кюветы для красителей, фиксаторов, отмывочных растворов.

Источник

Какую процедуру необходимо провести перед тем как окрасить мазок

При каждом плановом посещении гинеколога в женской консультации, а так же при поступлении, процессе лечения и выписке из стационара проводится ряд исследований, в том числе берется мазок на флору.

Данный метод исследования направлен на выявление преобладающей флоры во влагалище и, как следствие, при наличии болезнетворных микроорганизмов, определение их типаи количества.
Плановый осмотр. При плановом посещении гинеколога следует предпринять ряд мер, для того чтобы результат исследования мазка был наиболее достоверным и информативным.

1) Мазок следует сдавать в промежутке между менструациями, либо через 3-4 дня после их окончания. Делать это следует для того, чтобы кровь, которая обладает противомикробным действием, не портила картину мазка.
2) За 1-2 дня до посещения гинеколога следует отказаться от полового контакта.
3) За 2-3 дня до взятия мазка не стоит проводить спринцеваний влагалища, дабы не вымывать флору

4) Следует отказаться от средств интимной гигиены за 1-2 дня до обследования, чтобы не нарушать кислотность среды влагалища и, как следствие, не влиять на флору.
5) Гигиенические процедуры должны заключаться лишь в подмывании теплой водой накануне вечером. Утром, непосредственно перед посещением, никаких процедур проводить не следует.

6) Любые лекарственные формы местного применения, такие как мази, свечи, вагинальные таблетки и т.д. могут радикально изменить соотношение микроорганизмов и, в результате, картину мазка. Поэтому за 1 неделю до проведения исследования требуется прекратить применять препараты, за исключением тех случаев, когда это оговаривалось с врачом.
7) По возможности, следует не мочиться за 2-3 часа до проведения манипуляции.

Экстренный забор мазка. При поступлении в стационар большинство пунктов выполнить не представляется возможным, поэтому мазки берутся утром, до принятия каких-либо гигиенических процедур.

Для определения динамики и большей достоверности, данный анализ рекомендуется сдавать в одном и том же заведении, дабы мазок рассматривался в одной лаборатории и тем самым, степень погрешности была бы минимальной.
Беременные женщины должны сдавать мазок на флору минимум три раза: в начале беременности, на сроке 30 и 38 недель.

— Вернуться в оглавление раздела «Гинекология»

Источник

Какую процедуру необходимо провести перед тем как окрасить мазок

В материале даны общие рекомендации по взятию мазков из урогенитального тракта для микроскопических исследований. Просим тщательно соблюдать данные рекомендации для повышения точности исследования.

Приготовление мазка — это нанесение отделяемого, полученного с поверхностей слизистых оболочек, на предметное стекло. Микроскопическое исследование включает не только идентификацию эпителия, микроорганизмов и других морфологических частиц, но также оценку их количества и соотношения. Качество мазка зависит от физиологического состояния пациента на момент взятия мазка. Наиболее информативным может быть клинический материал, если он получен при следующих условиях:

Перед взятием образца важно понимать, какой материал должен быть взят, и что предполагается обнаружить. Обычно во время обследования пациента необходимо брать несколько клинических образцов (не только для микроскопии, но также и для других лабораторных исследований). Важно помнить, что:

Клинический материал можно получать с помощью пластиковой бактериологической петли или ватного/дакронового тампона. Предпочтение во всех случаях следует отдавать дакроновым тампонам. При использовании бактериологической петли материал наносится на предметное стекло штриховыми движениями тонким слоем. Ватный/дакроновый тампон прокатывается по стеклу для перенесения материала. Все мазки, приготовленные для направления в лабораторию, должны быть высушены на воздухе, промаркированы и, при необходимости, зафиксированы.

Взятие материала для микроскопии нативных препаратов

Для микроскопии влажных нативных препаратов использует­ся отделяемое влагалища у женщин. У мужчин прямая микроско­пия влажных мазков проводится при наличии обильных выделе­ний из уретры с исследованием свободного отделяемого или смыва.

Вагинальный образец для приготовления влажного (нативного) мазка берется в зеркалах бактериологической петлей объемом 10 мкл с определенного анатомического участка (задний или бо­ковой свод). Материал из уретры берется бактериологической петлей объемом 1 мкл. Из препуциального мешка материал бе­рется ватным/дакроновым тампоном.

На предметное стекло помещается капля теплого физиологи­ческого раствора (оптимально 37°С). Вагинальные или уре­тральные выделения перемешиваются с каплей физиологиче­ского раствора, накрываются покровным стеклом и немедленно просматриваются с использованием светового микроскопа. Если врач не владеет методом прямой микроскопии, выделения поме­щаются в пробирку с теплым физиологическим раствором и не­медленно направляются в лабораторию для микроскопического исследования.

Взятие материала для микроскопии окрашенных препаратов у мужчин

Образец из уретры для окрашивания по Граму или метиленовым синим берется с помощью бактериологической петли объе­мом 1 мкл. У мужчин при наличии выделений из уретры поверх­ность головки и область наружного отверстия уретры должны быть очищены с помощью марлевого тампона, крайняя плоть отведена назад для предупреждения контаминации. При отсутст­вии свободных вьщелений необходимо попросить пациента слегка помассировать уретру скользящими движениями от основания пениса к его головке. В этом случае могут быть использованы ло­жечка Фолькмана или ватный/дакроновый тампон для взятия материала. После введения пластиковой петли в уретру на 1-2 см необходимо плоскость «глазка» петли двигать к отвер­стию, слегка нажимая на стенки уретры. Не рекомендуется вра­щать петлю во время процедуры взятия образца — для пациента это болезненно. После получения клинического материала петля накладывается на поверхность стекла и передвигается по нему несколько раз с легким нажатием. Петля должна оставить на стекле тонкую полоску клинического материала.

Образец из препуциального мешка берется ватным/дакроновым тампоном.

Взятие материала для микроскопии окрашенных препаратов у женщин

Образец из уретры для окрашивания по Граму или метиленовым синим берется с помощью бактериологической петли объе­мом 1 мкл. При наличии большого количества выделений наруж­ное отверстие должно быть очищено с помощью марлевого тампона. При отсутствии свободных выделений может быть про­веден легкий массаж уретры, выполняемый врачом. После введения пластиковой петли в уретру на 1-2 см необходимо плоскость «глазка» петли двигать к отверстию, слегка нажимая на заднюю и боковые стенки уретры. Не рекомендуется вращать петлю во время процедуры взятия образца — для пациентки это болезненно. После получения клинического материала петля накладывается на поверхность стекла и передвигается по нему несколько раз с легким нажатием. Петля должна оставить на стекле тонкую по­лоску клинического материала.

Образец из цервикального канала для приготовления окра­шенных препаратов берется в зеркалах ватным/дакроновым там­поном, специальной щеточкой или ложечкой Фолькмана. Необ­ходимо тщательно очистить наружное отверстие цервикального канала при помощи большого марлевого тампона от вагинальных выделений для предотвращения возможной контаминации. По­сле введения тампона в шеечный канал на 1-2 см его вращают несколько раз. Клинический материал должен быть перенесен с тампона на стекло как можно более тонким слоем.

Для микроскопического исследования окрашенных вагиналь­ных мазков материал берется в зеркалах с заднего или боковых сводов бактериологической петлей 10 мкл или ложечкой Фоль­кмана и тонким слоем распределяется на предметном стекле.

Взятие материала с шейки матки на онкоцитологию

Материал берется из двух отделов: с наружного зева (эктоцервикса) и цервикального канала (эндоцервикса) без предварительной обработки шейки матки тампоном с физиологическим раствором. Пользуются шпателем типа Эйра или любым другим, лучше специальной цитощеткой. Вращательными движениями при легком надавливании получают соскоб со всей поверхности шейки матки и цервикального канала одновременно. Шпателем или щеткой проводят по стеклу — получают две полосы: материал с шейки матки и цервикального канала. При наличии патологии шейки матки берут соскоб непосредственно с участка поражения. При лейкоплакии, эрозии, подозрении на рак необходимо приготовить не менее 2‐3 мазков. В этих случаях удобнее брать мазок под контролем кольпоскопа.

Помните, нельзя намазывать материал толстым слоем — в микроскоп видны только тонкие мазки. Участки с сильным «намазыванием» исключаются из исследования, т. к. невозможно качественно определить, что за тип клеток в получившемся месиве. С другой стороны, не наносите мазок с усилием, в этом случае клетки разрушаются, и в препарате не обнаруживается ничего, кроме обломков клеток.

Литература:
1. А. М. Савичева, Е. В. Соколовский, М. Домейка. Порядок проведения микроскопического исследования мазков из урогенитального тракта. Методические рекомендации для лечащих врачей. — СПб: «Издательство Н-Л», 2007. — 60 с. (Серия Ex libris «Журнал акушерства и женских болезней»), ISBN 978-5-94869-040-7.
2. «Вестник “Лаборатории ДНК-Диагностики”», № 3 (12)/2011 год, стр. 5-7.

Источник

Подготовка к микробиологическим исследованиям

Правила подготовки к некоторым микробиологическим исследованиям включены в соответствующие разделы (исследования мочи, кала, спермы). Для всех микробиологических исследований рекомендуется прекращение применения антибактериальных препаратов за 7-10 дней до взятия материала.

Микробиологические исследования отделяемого половых органов

В течение 1 месяца перед исследованием пациенты не должны принимать антибиотики. У женщин взятие биологического материала лучше всего проводить не ранее чем через 5 дней после окончания менструации. Перед взятием материала пациентам рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение 1,5-2 часов. При наличии гнойных выделений соскоб рекомендуется брать через 15-20 минут после мочеиспускания.

У мужчин исследование проводится утром до мочеиспускания, или пациентам рекомендуется не мочиться в течение 2-4 часов до взятия пробы.

Посев грудного молока

Перед сбором материала грудь помыть теплой водой с мылом, вытереть чистым полотенцем, тщательно обработать соски и околососковую область молочных желез ватным тампоном, смоченным 70% этиловым спиртом (каждая железа обрабатывается отдельным тампоном).

Первые 10-15 мл сцеженного молока для анализа не используются.

Последующие 3-4 мл молока собираются из каждой груди в отдельный стерильный контейнер (подписать — правая и левая). Материал доставить в лабораторное отделение в течение 2-х часов после сбора.

Сбор секрета предстательной железы на посев

Секрет простаты получают в процессе энергичного массажа предстательной железы врачом-урологом. Материал собирается в стерильный контейнер после туалета наружного отверстия мочеиспускательного канала теплой водой с мылом.

Исследование мазка из зева

Мазок из зева берется строго натощак, перед исследованием за 3 часа нельзя принимать пищу, чистить зубы, полоскать рот водой, пить. При проведении исследования на дифтерию берутся два мазка: из зева и носа.

Источник